Hoe de kolom reinigen en regenereren na vervuiling?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday

Summary: Wanneer een chromatografische kolom verontreinigd is, zal het chromatografische gedrag enigszins afwijken van dat van een niet-verontreinigde kolom. Verontreinigde kolommen kunnen tegendrukproblemen veroorzaken. De verontreinigde omgekeerde-fasek......

Wanneer een chromatografische kolom verontreinigd is, zal het chromatografische gedrag enigszins afwijken van dat van een niet-verontreinigde kolom. Verontreinigde kolommen kunnen tegendrukproblemen veroorzaken. De verontreinigde omgekeerde-fasekolom moet worden gereinigd en geregenereerd om de oorspronkelijke bedrijfsomstandigheden te herstellen.
De sleutel tot het regenereren van een verontreinigde HPLC-kolom is om de aard van de verontreiniging te kennen en een geschikt oplosmiddel te vinden om deze te verwijderen. Als de verontreiniging wordt veroorzaakt door de ophoping van sterk vastgehouden stoffen tijdens herhaalde injecties, kunnen eenvoudige stappen om deze verontreinigingen te verwijderen vaak het chromatografische gedrag herstellen. Soms, na vele bewerkingen, wordt de chromatografische kolom gewassen met 90-100% oplosmiddel B (het sterkere oplosmiddel in het twee-oplosmiddel omgekeerde fasesysteem) voor 20 volumes om verontreinigingen te verwijderen. Voor de resterende lipiden in de kolom kunnen bijvoorbeeld niet-waterige oplosmiddelen zoals methanol, acetonitril en tetrahydrofuran worden gebruikt.

Over het algemeen hebben alle reinigingsmethoden vergelijkbare vormen. De gebruikte oplosmiddelen nemen toe met de sterkte van het oplosmiddel. Vaak is het laatste oplosmiddel erg hydrofoob (zoals ethylacetaat of zelfs koolwaterstof) en kan het worden gebruikt om niet-polaire stoffen zoals lipiden en oliën op te lossen. We moeten ervoor zorgen dat elk oplosmiddel in een reeks oplosmiddelen kan worden gemengd met het volgende oplosmiddel.
Aan het einde van het reinigingsproces is het noodzakelijk om met behulp van een middelsterk mengbaar oplosmiddel terug te keren naar het oorspronkelijke oplosmiddelsysteem. Isopropanol is bijvoorbeeld een zeer goed oplosmiddel als tussenstap omdat het mengbaar is met n-hexaan of dichloormethaan en ook met oplosmiddelen in de waterfase. De viscositeit van isopropanol is echter zeer hoog en er moet voor een laag debiet worden gezorgd om overmatige pompdruk te voorkomen. Bij het spoelen van de chromatografische kolom wordt de spoelvloeistof rechtstreeks aangesloten op de afvalfles vanaf het uitlaatuiteinde van de chromatografische kolom en kan deze niet door de detectiecel stromen om verontreiniging van de detectiecel te voorkomen.
Omgekeerde fase chromatografische kolom gebruikt geen bufferoplossing, gebruik de volgende oplosmiddelreeksen om te regenereren:
100% methanol → 100% acetonitril → 75% acetonitril-25% isopropanol → 100% isopropanol → 100% methyleenchloride → 100% n-hexaan → 100% methyleenchloride → 100% isopropanol → 100% acetonitril.
Omgekeerde fase chromatografiekolom gebruikt bufferoplossing, gebruik de volgende oplosmiddelreeksen om te regenereren:
water → acetonitril → chloroform (of isopropanol) → acetonitril → water.33