Veelgestelde vragen over celcultuur beantwoord

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2022-07-14 16:15:00 Thursday

Summary: 1. Als ik een flacon met bevroren cellen ontvang, kan ik deze dan direct in vloeibare stikstof bewaren? In veel gevallen kunnen cellen die op droogijs (-80°C) worden vervoerd, worden teruggebracht naar vloeibare stikstof en vervolgens snel wo......

1. Als ik een flacon met bevroren cellen ontvang, kan ik deze dan direct in vloeibare stikstof bewaren?
In veel gevallen kunnen cellen die op droogijs (-80°C) worden vervoerd, worden teruggebracht naar vloeibare stikstof en vervolgens snel worden ontdooid. Een dergelijke behandeling kan echter de levensvatbaarheid van de cellen verminderen. Voor sommige gevoelige cellijnen kan dit celherstel bemoeilijken. Men denkt dat dit fenomeen te wijten is aan veranderingen in de structuur van intracellulaire ijskristallen als gevolg van temperatuurveranderingen. Daarom wordt aanbevolen dat cellen zo snel mogelijk na ontvangst worden ontdooid en gekweekt. Het is het beste om de bewaartijd bij -80°C te verkorten, bij voorkeur wordt deze temperatuur alleen gebruikt voor verzending.

2. Waarom moeten cellen in de gasfase worden opgeslagen in plaats van de vloeibare fase in een tank met vloeibare stikstof?
Cellen worden opgeslagen in vloeibare stikstoffase voor eenvoudiger herstel. In de vloeibare fase van vloeibare stikstof, als het cryobuisje niet goed is afgesloten of lekt, komen de cellen in direct contact met de vloeibare stikstof, wat de levensvatbaarheid van de cellen na ontdooien zal beïnvloeden.

3. Hoe het medium voor suspensiecellen veranderen?
Cellen in suspensie kunnen worden gekweekt door eenvoudig vers medium toe te voegen (als de ruimte dit toelaat) of door cellen los te maken van oud medium door centrifugeren (100 x g gedurende 5 min), gevolgd door het opnieuw suspenderen van de gepelleteerde cellen in vers medium. Voor de meeste suspensiecellijnen is het eenvoudigweg toevoegen van medium echter een betere benadering. Beide methoden vereisen dat het medium wordt ververst voordat cellen hun maximale verzadigingsdichtheid bereiken. De verzadigingsdichtheid van cellen ligt tussen 3 x 105 en 2 x 106, afhankelijk van de cellijn en kweekomstandigheden (rust of agitatie, oxygenatieniveau, enz.).

Cellen moeten worden verdund tot lagere celconcentraties om voldoende nutriëntenterugwinning mogelijk te maken om cellen in logaritmische groei te houden. Als het medium eenvoudig wordt vervangen zonder de celdichtheid te verminderen, zullen de cellen het medium snel uitputten en afsterven. Als cellen worden verdund tot onder hun minimale dichtheid, komen ze in een lag-fase, groeien ze heel langzaam of sterven ze. Elke suspensiecellijn heeft een andere verzadigingsdichtheid en passage-interval, dus dagelijkse celtellingen zijn de beste manier om een suspensiecellijn te controleren.3