Summary: Nadat een laboratorium een nieuwe cellijn heeft verkregen, moet de cellijn eerst worden gekweekt en uitgebreid en vervolgens worden ingevroren. De cryopreservatie van cellen kan in de eerste plaats worden gebruikt als back-up wanneer c......
Nadat een laboratorium een nieuwe cellijn heeft verkregen, moet de cellijn eerst worden gekweekt en uitgebreid en vervolgens worden ingevroren. De cryopreservatie van cellen kan in de eerste plaats worden gebruikt als back-up wanneer cellen verloren gaan door vervuiling en andere omstandigheden. Bovendien ondergaan bijna alle cellen een zekere mate van variatie tijdens het kweek- en passageproces. Om de consistentie van experimentele resultaten te behouden, kunnen cellen over het algemeen niet worden gekweekt voor tientallen generaties. Als het opnieuw wordt gebruikt, moeten de gecryopreserveerde, minder gepasseerde cellen vóór gebruik worden ontdooid en gekweekt.
Er zijn vier hoofdpunten in het celbevriezingsproces: celoogst, gebruik van beschermende middelen, bevriezingssnelheid en bewaaromgeving.
cel oogst
De cellen die worden gebruikt voor cryopreservatie worden in het algemeen geselecteerd wanneer de cellen ongeveer 90% confluent zijn. Op dit moment is de celgroei goed en is het aantal cellen groot, en het kweekmedium moet 24 uur vóór het oogsten van de cellen worden vervangen. De methode voor het oogsten van de cellen voor cryopreservatie is hetzelfde als gebruikelijk. Centrifugeer bij 100xg gedurende 5 minuten om de cellen te verzamelen en ze opnieuw te suspenderen. De levende cellen worden geteld. Verdun of concentreer tot tweemaal de uiteindelijke celconcentratie voor celconservering (meestal 4-10 miljoen cellen/ml), voeg een gelijk volume van de bereide mengseloplossing van het kweekmedium-beschermend middel toe en meng voorzichtig, en aliquot in de cryopreservatiebuis, cryopreservatie.
Gebruik van beschermende middelen.
Bij celcryopreservatie wordt DMSO over het algemeen gebruikt als een beschermend middel. Bij celcryopreservatie is de uiteindelijke concentratie van DMSO die wordt gebruikt in het algemeen 5-15%. De concentratie van DMSO in de cryopreservatie-oplossing van een specifieke cel is te vinden in ATCC. Voor bijzonder gevoelige cellen, vooral hybridomacellen, kan het beter zijn om 95% serum en 5% DMSO te gebruiken bij cryopreservatie. Gebruik bij gebruik van het beschermende middel kweekmedium of serum om tweemaal de eindconcentratie te maken en meng het vervolgens met een gelijk volume suspensiecelkweekmedium. Celbevriezingssnelheid
De bevriezingssnelheid van cellen kan het beste worden gecontroleerd om voldoende tijd te geven om de cellen te dehydrateren zonder te worden beschadigd door overmatige uitdroging. Voor de meeste cellen is een temperatuurdaling van 1 tot 3°C per minuut geschikt. De gebruikelijke handeling is om de cellen 1-2 uur bij -20°C te plaatsen en ze vervolgens een nacht in de -80°C koelkast te plaatsen (als er geen -80°C koelkast is, kunt u in plaats daarvan droogijs gebruiken), en vervolgens overbrengen naar de tank met vloeibare stikstof of lager -130 Langdurige opslag in de koelkast bij ℃.
Opslagomgeving
De langdurige opslagtemperatuur van cellen is -130 of lager. De temperatuur van de gasvormige laag in de tank met vloeibare stikstof ligt tussen -140℃ en -180℃. Cellen kunnen worden opgeslagen in de gasvormige laag of worden ondergedompeld in vloeibare stikstof. Indien mogelijk bewaart u best in de gaslaag, omdat hiermee kan worden voorkomen dat vloeibare stikstof in de vriesopslag terechtkomt. De buis veroorzaakt een explosie wanneer de cellen worden verwijderd (maar op deze manier kan slechts een kleine hoeveelheid vloeibare stikstof worden opgeslagen in de tank met vloeibare stikstof, die vaak moet worden toegevoegd). De cellen kunnen ook een paar maanden in de koelkast bij -80℃ worden bewaard.
英语
阿拉伯语
���ļ���