Hoe kies je de juiste kolom?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-04 17:32:46 Thursday

Summary: ① Chromatografische kolompakkingsmatrix A. Silicagelmatrix: hoge zuiverheid, lage kosten, hoge sterkte, gemakkelijke chemische modificatie, maar het pH-bereik is beperkt. De meeste silicamatrixvullers zijn stabiel tussen pH 2-8, maar de specia......

① Chromatografische kolompakkingsmatrix
A. Silicagelmatrix: hoge zuiverheid, lage kosten, hoge sterkte, gemakkelijke chemische modificatie, maar het pH-bereik is beperkt. De meeste silicamatrixvullers zijn stabiel tussen pH 2-8, maar de speciaal gemodificeerde silicagelgebonden fase kan worden gestabiliseerd bij pH 1,5-10.
B. Polymeermatrix: breed toepassings-pH-bereik, stabiele temperatuur (hoge temperatuur kan oplopen tot boven 80 graden) en lage mechanische sterkte.
②Deeltjevorm
De meeste moderne HPLC-vulstoffen zijn bolvormige deeltjes, maar soms ook onregelmatige deeltjes. Sferische deeltjes zorgen voor een lagere kolomdruk, hogere kolomefficiëntie en stabiliteit en een langere levensduur van de kolom. Bij gebruik van een hoogviskeuze actieve fase; onregelmatige deeltjes hebben een groter specifiek oppervlak en een relatief lage prijs.
③deeltjesgrootte
Hoe kleiner de deeltjesgrootte, hoe hoger het rendement en hoe hoger de resolutie, maar tegelijkertijd zal het leiden tot een hogere kolomdrukval. Kies 1,5-3 m verpakkingsmateriaal om enkele complexe monsters op te lossen, UPLC kan 1,5 m pakking gebruiken; een andere pakking met een deeltjesgrootte van 10 m of groter wordt gebruikt als semi-preparatieve of preparatieve kolom.
④Koolstofgehalte
Het koolstofgehalte van een chromatografische kolom verwijst naar de verhouding van de gebonden fase op het oppervlak van de silicagel, die gerelateerd is aan het specifieke oppervlak en de bindingsdekking. Een hoog koolstofgehalte verbetert de kolomcapaciteit, resolutie en analysetijd en wordt gebruikt voor complexe monsters die een hoge resolutie vereisen; laag koolstofgehalte heeft een korte analysetijd en vertoont verschillende selectiviteit, en wordt gebruikt voor snelle analyse van eenvoudige monsters en actieve fasen met een hoog watergehalte. Conditie monsters. Over het algemeen varieert het koolstofgehalte van C18 van 7-19%.
⑤ Poriëngrootte en specifiek oppervlak
HPLC-adsorptiemedium bestaat uit poreuze deeltjes en het grootste deel van het reactieoppervlak bevindt zich in de poriën. Daarom moeten moleculen de poriën binnendringen om te worden geadsorbeerd en gescheiden.
Chromatografische kolomporiegrootte en specifiek oppervlak zijn twee complementaire concepten. De poriegrootte is klein en het specifieke oppervlak is groot, en vice versa. Groot specifiek oppervlak, verhoogt de reactie tussen het monster en de gebonden fase, verhoogt de opslag, monsterlading en scheiding van complexe componenten; klein specifiek oppervlak, snelle evenwichtstijd, geschikt voor gradiëntanalyse.
⑥ Poriënvolume en mechanische sterkte
poriënvolume, ook wel "poriënvolume" genoemd. Verwijst naar de grootte van het lege volume per deeltje. Het kan de mechanische sterkte van het vulmiddel goed weerspiegelen. Fillers met een groot poriënvolume hebben een iets zwakkere mechanische sterkte dan die met een klein poriënvolume. Vulstoffen met een porievolume van 1,5 ml/g of minder worden meestal gebruikt voor HPLC-scheiding, terwijl vulstoffen met een porievolume groter dan 1,5 ml/g worden gebruikt voor grootte-uitsluitingschromatografie en lagedrukchromatografie.
⑦ eindkap
Kolomeindkappen kunnen de staartpieken van polaire basische verbindingen verminderen vanwege de interactie met blootgestelde silanolgroepen. De niet-geblokkeerde gebonden fase zal een andere selectiviteit hebben in vergelijking met de geblokkeerde gebonden fase, vooral voor polaire monsters.3